卵巢恶性肿瘤的DNA倍体分析及临床意义

【摘要】目的:分析卵巢恶性肿瘤及交界性肿瘤的DNA倍体，探讨其临床意义。方法:采用流式细胞术测定新鲜卵巢恶性肿瘤及交界性肿瘤组织标本的DNA倍体。结果:6例正常卵巢组织均为DNA二倍体，30例卵巢恶性肿瘤及交界性肿瘤中DNA异倍体23例(76.67%)，其中20例上皮性恶性卵巢肿瘤DNA异倍体15例(60%)，5例非上皮性卵巢癌DNA异倍体5例(100%)，5例交界性卵巢肿瘤DNA异倍体3例(60%);与正常卵巢组比较差异有统计学意义(P<0.01);卵巢恶性肿瘤的DI值与病理类型及临床分期无关(均P>0.05)。结论:DNA倍体测定可用于卵巢恶性肿瘤的辅助诊断。

【关键词】卵巢癌 DNA倍体 病理分级

卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，也是目前死亡率最高的妇科恶性肿瘤。其早期缺乏特异性临床指征，肿瘤细胞组织学分类复杂，50%～70%患者就诊时已属晚期。人体正常细胞是恒定的DNA二倍体或四倍体，当受到致癌因素刺激时，DNA被损伤成为DNA异倍体细胞，本文分析卵巢恶性肿瘤及交界性肿瘤的DNA倍体，可为卵巢肿瘤的诊断和预后判断提供依据。

1、材料和方法

1.1 病例资料

取宁夏地区2005年7月-2005年12月期间手术并经病理学证实为卵巢恶性或交界性肿瘤的患者30例，患者年龄平均46.1岁，最小21岁，最大71岁。所有患者术前均未接受化疗及放疗，参照WHO制定的组织学分类标准，其中交界性卵巢肿瘤5例(交界性浆液性囊腺瘤3例，交界性黏液性囊腺瘤2例);上皮性卵巢癌20例(浆液性囊腺癌12例，黏液性囊腺癌8例)，非上皮性卵巢癌5例(其中颗粒细胞瘤3例，转移性卵巢癌2例);组织学分级采用3级分法。25例卵巢癌中，病理分化程度为中-高分化者6例，低分化者19例;根据国际妇产科联盟(FIGO)2000年分期标准，Ⅰ期7例，Ⅱ期7例，Ⅲ期11例，无Ⅳ期病例。另取同期因其它良性疾病同时行卵巢切除，并经病理学证实卵巢组织无异常病理的患者6例为正常对照组，其中，子宫肌瘤3例，宫颈原位癌2例，单侧卵巢单纯性囊肿1例，平均年龄42.3岁。

1.2 实验方法

1.2.1 单细胞悬液制备：取手术切除的新鲜肿瘤组织标本或-180℃冻存的肿瘤组织，进行HE染色，选择瘤细胞含量丰富的标本制备单细胞悬液^①，进行DNA倍体测定。

1.2.2 DNA倍体测定：采用美国Becton-Dickinson公司生产的FACSCalibur型流式细胞仪进行测定，每份标本测定104个细胞核，以正常卵巢组织作为外标。DNA指数(DI)为异倍体G0/G2峰均道指与二倍体G0/G1峰均道指之比，表示DNA相对含量;当DNA直方图上只有一个G0/G1(D1=1)时为DNA二倍体;若出现明显的2个或2个以上G0/G1(D1>1.1)，且其后有相应的S期及G2M期峰为异倍体^②。

1.3 统计学方法实验数据以均数±标准差(±s)表示，样本率的比较采用卡方检验，两样本均数的比较采用方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义;本实验数据采用SPSS12.0分析软件进行分析。

2、结果

2.1 各组DNA异倍体率比较

6例正常卵巢组织均为DNA二倍体;30例卵巢恶性肿瘤及交界性肿瘤中DNA异倍体23例(76.67%)，其中20例上皮性恶性卵巢肿瘤DNA异倍体15例(60%)，5例非上皮性卵巢癌DNA异倍体5例(100%)，5例交界性卵巢肿瘤DNA异倍体3例(60%)，与正常卵巢组比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。

2.2 各组细胞DI值比较

2.3 不同病理类型卵巢癌DI值的比较

2.4 不同临床分期卵巢恶性肿瘤DI值比较

3、讨论

在生物细胞中，DNA含量是恒定的参量，并随细胞周期发生有规律的变化。肿瘤的发生有其复杂的病因学和病理学机制，但机体细胞内在的遗传物质变化是一切肿瘤发生的基础。人体正常的体细胞染色体均为二倍体，当细胞受到致癌物质刺激，DNA损伤，导致细胞基因突变与染色体畸形断裂，使细胞在增殖分裂的过程中出现DNA量的丢失、扩增或染色体移位等，导致细胞DNA质和量的异常，使原有的细胞生物学特征发生改变，成为DNA含量异常的肿瘤细胞^②。在二倍体基础上多或少一条或几条染色体，或者染色体组成发生增减的细胞个体成为异倍体(Heteroploid)。

研究表明，人类大多数肿瘤细胞的染色体都有异常，表现为染色体结构和数目的异常。文献报道，卵巢癌组织中DNA异倍体的检出率在51%～82%之间^③。本实验中30例卵巢恶性肿瘤及交界性肿瘤DNA异倍体率为76.67%，上皮性卵巢癌DNA异倍体率为60%，与文献报道相符，6例正常卵巢组织均为二倍体，无异倍体出现，恶性卵巢肿瘤组织中DI值明显高于正常卵巢组织，进一步证实恶性肿瘤标本的DNA含量发生改变，通过对细胞DNA含量的研究，有助于卵巢恶性肿瘤的定性诊断。

目前，对于卵巢恶性肿瘤DNA含量与病理类型的关系尚有争论^④。本实验中，5例非上皮性卵巢癌均出现DNA异倍体，其DI值与上皮性卵巢癌比较差异无统计学意义，但由于本组样本例数较少，尚不能得出结论。

有关DNA含量及DNA倍体与卵巢恶性肿瘤临床分期的关系已有一些报道，一些研究认为，卵巢恶性肿瘤DNA含量及DNA异倍体率随着临床分期的增加而增高，但也有不同报道，本实验结果显示，DI值及DNA异倍体率与临床分期无关。

卵巢交界性肿瘤(borderlineovariantumors,BOT)又称为具有低度恶性潜能的卵巢上皮性肿瘤(ovarianepithelialtumoroflowmalignant,LMP)，是一组介于良、恶性肿瘤之间的一类特殊类型的卵巢肿瘤，1973年世界卫生组织正式将其命名。Karen等^⑤对交界性卵巢肿瘤进行DNA定量分析，初步研究结果表明DNA异倍体交界性卵巢肿瘤恶性程度高、易复发，生存期短，但也有人持不同意见。本研究5例交界性卵巢肿瘤，其中有3例出现DNA异倍体，异倍体率为60%，且其DI值低于卵巢恶性肿瘤组，两组比较差异有统计学意义。有研究认为，异倍体交界性肿瘤较二倍体肿瘤复发的危险性明显增高，此外，部分交界性肿瘤难以与卵巢癌鉴别。DNA异倍体的出现是癌变的重要标志，是否可以将DNA二倍体交界性卵巢肿瘤视为低度恶性潜能的肿瘤，而将DNA异倍体交界性卵巢肿瘤视为卵巢癌，有待于进一步研究。

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