S100A4和Ecadherin在上皮性卵巢肿瘤中的表达及意义

【摘要】目的：研究S100A4蛋白和上皮钙粘蛋白(Ecadherin，Ecad)在人类上皮性卵巢肿瘤中的表达情况，探讨并分析两者与上皮性卵巢癌的浸润、转移发生的关系及其生物学意义。方法：采用免疫组织化学法SP法检测S100A4蛋白和Ecad在上皮性卵巢肿瘤中的表达与分布，结合临床病理情况分析两者与临床病理参数之间的关系。结果：上皮性卵巢癌中S100A4的表达率比卵巢良性肿瘤和上皮性卵巢交界性肿瘤中的表达率增高(P<0.05);S100A4在上皮性卵巢癌中的表达与组织学分级、有无转移、有无腹水有关(P<0.05)，与临床病理分期无关(P>0.05);Ecad在上皮性卵巢癌的表达与临床分期、有无转移、有无腹水有关(P<0.05)，而与组织学分级无关(P>0.05);S100A4,Ecad在上皮性卵巢癌中的表达与有无绝经、肿瘤大小、临床病理类型无关(P>0.05);上皮性卵巢癌中S100A4和Ecad的表达呈负相关(r=-0。385，P<0.05)。结论：S100A4和Ecad的相关表达与上皮性卵巢癌的发生发展关系密切，是判断上皮性卵巢癌生物学行为、预测侵袭转移的重要指标。

【关键词】卵巢肿瘤;S100A4;钙粘着糖蛋白类;肿瘤转移

引言

侵袭和转移是恶性肿瘤患者死亡的重要原因，肿瘤的转移包括细胞骨架的丢失、癌细胞的脱落等过程，此过程与Ecad和转移相关蛋白S100A4有非常密切的关系。S100A4蛋白是最近从S100蛋白家族筛选的一个与恶性肿瘤预后相关的一个因子^①，Ecad分布于细胞细胞黏附连接处，是介导相邻细胞的同型黏附，其异常表达促使恶性肿瘤的转移^②。我们探讨S100A4和Ecad的表达与上皮性卵巢癌的侵袭转移之间的关系，为临床上上皮性卵巢癌的诊断治疗、预后评估提供依据。

1、材料和方法

1.1 材料

标本取自陕西省妇幼保健院和渭南市中心医院200401/200703手术切除的上皮性卵巢肿瘤48例，均经40g/L甲醛固定、常规脱水、包埋。其中良性上皮性卵巢肿瘤10例(浆液性囊腺瘤6例，黏液性囊腺瘤4例)，交界性卵巢肿瘤8例(浆液性交界性囊腺瘤5例，黏液性交界性囊腺瘤3例)，上皮性卵巢癌30例(浆液性卵巢癌18例，黏液性卵巢癌12例)，在卵巢癌患者中，所有患者术前均无化疗放疗史，无烟酒毒物接触史，无癌症家族史，按照国际妇产科联盟(FIGO)2000年标准，其中Ⅰ期6例，Ⅱ期8例，Ⅲ期9例，Ⅳ期7例;组织学分级：按WHO分级标准：其中Ⅰ级10例，Ⅱ级8例，Ⅲ级12例，并取同时期手术因其他良性疾病而切除的正常卵巢组织6例，所有患者年龄在30~69岁之间。

1.2 方法

S100A4多克隆抗体和EcadmAb购自北京中杉生物技术公司，组化染色按SP试剂盒提供的说明书进行，中杉公司提供的阳性切片作阳性对照，以PBS代替一抗行阴性对照。每张切片随机选择5个高倍视野，采用半定量计分法判定结果。Ecad以胞膜呈黄色或棕黄色为阳性细胞，按阳性细胞所占比例^③④计算阳性细胞百分数，膜着色连续清楚且阳性细胞数>75%定义为4分，着色淡不连续且阳性细胞数50%～75%定义为3分，阳性细胞数25%～50%定义为2分，阳性细胞数<25%为1分，着色为棕黄色为3分，着色为黄色为2分，着色为淡黄色为1分，基本不着色为0分，>10%的细胞质或胞核出现棕黄色颗粒定义为异位表达，将每张切片平均着色程度得分与平均着色细胞百分率得分相乘为其最后得分，总分≥6者为阳性表达，总分<6者为膜表达减弱，膜表达减弱或异位表达统一定义为阴性表达。S100A4的染色结果判定：S100A4以胞质或胞核出现黄色颗粒为阳性细胞，高倍镜下将阳性细胞数<10%为1分，阳性细胞数在10%~50%为2分，阳性细胞数>50%为3分，将<3分者为S100A4阴性表达，等于3分为阳性表达。

1.3统计学处理：采用统计学软件SPSS11.5进行分析，样本率的比较用χ2检验或Fisher确切概率法，S100A4与Ecad表达的相关性分析用Spearman等级相关法，P<0.05为有统计学意义。

2、结果

2.1 S100A4及Ecad在正常卵巢组织和上皮性卵巢肿瘤中的表达 S100A4在胞质中表达，Ecad在胞膜中表达，且都在相应部位呈棕黄色或棕褐色。S100A4和Ecad在正常卵巢组织无表达，Ecad表达从良性组、交界性组、恶性组呈逐渐减低的趋势，而S100A4呈现逐渐升高的趋势，恶性组分别与良性组交界性组间有统计学差异(P<0.05)。S100A4和Ecad在上皮性卵巢肿瘤中的表达

2.2 S100A4，Ecad的表达与上皮性卵巢癌临床病理参数的关系S100A4的表达 与组织分化、有无腹水、转移有关(P<0.05);而与其他参数无关(P>0.05);组织分化越低，S100A4的表达越高(P<0.05);虽然S100A4在晚期卵巢癌的表达比早期卵巢癌增高，但无统计学意义(P>0.05);Ecad的表达与临床分期、有无转移以及有无腹水有关(P<0.05,S100A4和Ecad表达与上皮性卵巢癌临床病理参数的关系

2.3 S100A4和Ecad表达的相关性  30例上皮性卵巢癌组织中S100A4阳性表达和Ecad阴性表达的共有15例，相关性分析结果显示，卵巢癌组织中S100A4和Ecad的表达呈负相关(r=-0.385，P<0.05)。

3、讨论

S100A4是一个与恶性肿瘤侵袭、转移等病理过程密切相关的蛋白，Kerisebilck等^⑤报道S100A4基因转染小鼠乳腺细胞系后，细胞Ecad基因的表达减低，且细胞中catenin分布状态发生紊乱，使Ecad不能正常介导同型细胞间的黏附，肿瘤细胞易脱离母体肿瘤而发生转移。S100A4蛋白以共价键二聚体和非公价键二聚体存在于体内，以共价键二聚体存在于细胞间质中的S100A4蛋白的存在是细胞间信号传导，细胞与细胞基质相互作用的基础，也是肿瘤细胞侵袭和转，也是肿瘤细胞侵袭和转移的病理基础^①。Cho等^⑥研究发现S100A4的表达与结直肠癌的肿瘤分期及淋巴结转移率密切相关，但与肿瘤的定位、大小及患者的生存时间无关。随后对癌组织进行S100A4基因突变的检测，结果无S100A4基因突变的存在。

Jenkinson等^⑦研究发现S100A4蛋白的表达与细胞的异常增生及肿瘤的发生、发展有关。本试验研究结果显示S100A4的阳性表达与临床分期无关，虽然有报道S100A4在肺癌、结直肠癌的表达与临床分期有关，但与Kikuchi等^④的研究结果一致，而且在Kikuchi的研究中发现对于同一期别的卵巢癌患者，S100A4在胞核的表达越高，与无胞核表达的组织相比，患者的生存期明显缩短，特别是对于Ⅰ/Ⅱ期的卵巢癌患者。

现有研究表明Ecad表达变化可能与以下机制有关，如Ecad基因突变，基因启动子的甲基化，基因启动子上单个核苷酸的多态性以及肿瘤部位的蛋白酶活性升高等^⑧。本研究证实正常卵巢上皮细胞不表达Ecad，而在卵巢良性肿瘤中Ecad表达增高，可能Ecad在卵巢新生物的形成及向恶性发展过程中行使某种功能^⑨。本研究中我们发现Ecad的阳性表达与临床分期有关，分期为Ⅰ,Ⅱ期者表达高于Ⅲ,Ⅳ期，表明Ecad与肿瘤的浸润、转移有关。Ecad表达下调将使同种细胞失去黏附，正常组织不能发育成形。对于恶性肿瘤而言则细胞极性丧失、呈现恶性细胞形态并具备侵袭性生长的特性。当Ecad活性正常瘤细胞不易从原发灶上脱落下来，而当Ecad失活导致细胞间黏附作用下降和极性紊乱，促使肿瘤的转移^⑩。研究发现，在膀胱癌、肺癌、肾癌、大肠癌等大多数肿瘤中均有Ecad的表达减弱或缺失，且与肿瘤的临床分期，组织分化、浸润转移及复发有密切关系，是预示肿瘤进展及预后的重要指标之一^⑾，本试验中我们发现分化程度低者，Ecad的阳性表达也偏低，但无统计学意义，可能与我们的结果判断标准不同有关。我们研究发现Ecad在恶性肿瘤中部分在胞质表达可能是无功能的Ecad经蛋白水解，产物释放入胞质所致。虽然S100A4和Ecad的表达呈负相关有待进一步研究，但S100A4可能通过肌动蛋白细胞骨架动力促进细胞运动，引起Ecad表达下调，使其不能介导同种细胞的黏附，使肿瘤细胞脱离母体肿瘤而发生转移^⑿。

近几年对S100A4蛋白与肿瘤生物学行为的研究已受到重视，其在多种肿瘤的研究已相继开展，然而S100蛋白促肿瘤发生发展作用的具体机制尚未完全阐明，有待进一步研究。S100A4蛋白和Ecad的关系密切，可能成为判断肿瘤预后的一个指标，为指导临床治疗提供一定的依据。

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